一、實(shí)驗(yàn)原理
新物體識別實(shí)驗(yàn)基于嚙齒類動物對新穎物體的天然探索偏好，通過檢測小鼠對新舊物體的探索時(shí)間差異，評估其空間記憶與認(rèn)知能力。該實(shí)驗(yàn)成本低、操作簡單，廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)、藥wu篩選及行為學(xué)研究。
二、實(shí)驗(yàn)流程
1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
實(shí)驗(yàn)箱：透明塑料或玻璃箱（推薦尺寸：40×40×40 cm），底部鋪墊干凈墊料，保持環(huán)境安靜、光線柔和（約200 lux）。
實(shí)驗(yàn)物體：選擇無氣味、非毒性材質(zhì)（如塑料、金屬）的物體，形狀差異明顯（如立方體、圓柱體），避免小鼠因材質(zhì)偏好影響結(jié)果。實(shí)驗(yàn)分組對照組（正常小鼠）與實(shí)驗(yàn)組（如藥wu處理組），每組≥10只，隨機(jī)分配。
2. 訓(xùn)練階段（Habituation）
適應(yīng)環(huán)境將小鼠放入空實(shí)驗(yàn)箱，自由探索10分鐘，消除環(huán)境應(yīng)激。物體預(yù)暴露移除小鼠后，在箱內(nèi)放置兩個(gè)相同物體（A、A’），小鼠返回后繼續(xù)探索10分鐘，確保其對物體無恐懼。
3. 測試階段（Testing）
替換新舊物體：移除一個(gè)舊物體（A），替換為新物體（B），保持位置隨機(jī)（避免空間偏差）。
記錄探索時(shí)間：通過視頻跟蹤軟件（如EthoVision）或人工記錄，統(tǒng)計(jì)小鼠探索新舊物體的時(shí)間（鼻尖接觸物體≥1秒計(jì)為有效探索）。
測試時(shí)長：通常為5-10分鐘，時(shí)間過長可能導(dǎo)致小鼠疲勞。
4. 數(shù)據(jù)分析
辨別指數(shù)（DI）計(jì)算公式：DI = (新物體時(shí)間 - 舊物體時(shí)間) / (新物體時(shí)間 + 舊物體時(shí)間) ×100%。
判斷標(biāo)準(zhǔn)DI≥0表示偏好新物體（正常認(rèn)知），DI<0或無顯著差異提示認(rèn)知障礙。
三、避坑指南
1. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)階段
樣本量不足
每組至少10只小鼠，個(gè)體差異可能導(dǎo)致結(jié)果偏差。物體選擇不當(dāng)避免使用帶孔洞、可移動的物體（可能引發(fā)啃咬或恐懼），確保新舊物體材質(zhì)、重量一致。環(huán)境干擾實(shí)驗(yàn)期間保持安靜，避免震動或噪音；實(shí)驗(yàn)箱需徹底清潔（75%酒精擦拭），防止氣味殘留干擾。
2. 訓(xùn)練與測試階段
適應(yīng)時(shí)間不足跳過訓(xùn)練階段直接測試會導(dǎo)致小鼠焦慮，探索時(shí)間縮短。位置偏好干擾固定物體位置可能讓小鼠因探索習(xí)慣而非記憶產(chǎn)生偏差，建議每次測試隨機(jī)更換物體位置。測試時(shí)長過長超過10分鐘易導(dǎo)致小鼠疲勞，探索行為減少。
3. 數(shù)據(jù)分析階段
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忽略個(gè)體差異
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需剔除探索時(shí)間總和＜10秒的小鼠（可能因病或應(yīng)激）。
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未重復(fù)實(shí)驗(yàn)
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至少重復(fù)3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，避免偶然性誤差。
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數(shù)據(jù)正態(tài)性檢驗(yàn)
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若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，改用非參數(shù)檢驗(yàn)（如Mann-Whitney U檢驗(yàn)）。
四、常見問題與解決方案
問題1：小鼠不探索物體
→ 檢查物體清潔度、氣味；增加適應(yīng)時(shí)間或更換更醒目的物體（如反光材質(zhì)）。
問題2：DI值波動大
→ 確保實(shí)驗(yàn)條件一致（如光照、溫度）；增加樣本量。
問題3：藥wu干預(yù)后DI未變化
→ 確認(rèn)藥wu劑量與給藥時(shí)間合理；延長測試間隔觀察長期效應(yīng)。
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