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T迷宮實(shí)驗(yàn)常見問題與解決方案

1. 如果動(dòng)物不動(dòng)或行動(dòng)得很慢,有很多可能的原因和解決方法。對(duì)于獎(jiǎng)賞交替,首先檢查飼養(yǎng)籠里是否有未吃完的食物,也許是因?yàn)樗鼈兂缘锰嗔耍瑢?dǎo)致試驗(yàn)時(shí)動(dòng)機(jī)不足,但*可能的原因是適應(yīng)不到位。在適應(yīng)步驟時(shí),要確保所有動(dòng)物能夠立即鎖定放在飼養(yǎng)籠里的食物,之后,在其他逐漸接近測(cè)試場(chǎng)景的裝置中重復(fù)這一步驟,或者在迷宮地板上放置一層薄薄的飼養(yǎng)籠的墊料,以減少焦慮。睡覺或不合作的動(dòng)物,通??梢酝ㄟ^在飼養(yǎng)籠里給予少量獎(jiǎng)賞來(lái)“啟動(dòng)”它們,從而誘導(dǎo)它們行動(dòng)。拿一個(gè)裝滿牛奶的注射器,給每只小鼠擠出幾滴,它們會(huì)從注射器的末端舔舔它。對(duì)于大鼠,放一些獎(jiǎng)賞食丸。當(dāng)然,如果主要實(shí)驗(yàn)(而不是預(yù)訓(xùn)練)正在進(jìn)行,則必須對(duì)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組給予同等的激勵(lì)手段。此外,實(shí)驗(yàn)者可能特別感興趣的是感覺運(yùn)動(dòng)或動(dòng)機(jī)過程是否受到了處理因素的影響,在這種情況下,“補(bǔ)救措施”顯然是不合適的。

2. 還可能出現(xiàn)的問題是在一系列試驗(yàn)中,動(dòng)物的速度越來(lái)越慢,在某個(gè)時(shí)刻,它們就停止探索迷宮了。通常,一次測(cè)試(session)包括10次試驗(yàn)(1個(gè)采樣試驗(yàn)加9個(gè)測(cè)試試驗(yàn)),*多可以重復(fù)進(jìn)行3次。超過3次重復(fù)測(cè)試,就會(huì)有越來(lái)越多的小鼠開始超過時(shí)間限制,通常無(wú)法恢復(fù),并且不得不被排除在實(shí)驗(yàn)之外。在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí),*好設(shè)計(jì)不超過3次測(cè)試。如果需要4次或更多的實(shí)驗(yàn),應(yīng)考慮更大的樣本量,以彌補(bǔ)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的潛在損失(可以相對(duì)于期望的終樣本量增加40-50%)。然而,在某些情況下,一些動(dòng)物也可能在前三次測(cè)試就表現(xiàn)出高潛伏期。在這種情況下,聽覺或觸覺刺激可以用來(lái)促進(jìn)動(dòng)物沿著迷宮運(yùn)動(dòng)。需要強(qiáng)調(diào)的是,如果選擇了這一解決方式,就必須采用一個(gè)好的標(biāo)準(zhǔn),所有組的所有動(dòng)物都必須使用相同的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測(cè)試。若動(dòng)物不動(dòng),建議的標(biāo)準(zhǔn)是:在80 s 時(shí),使用聲音刺激(從動(dòng)物身體中心上方約30厘米處打響指3次,不要從左側(cè)或右側(cè)發(fā)出聲音,否則會(huì)產(chǎn)生空間偏倚);100 s時(shí),用長(zhǎng)棉簽的棉端輕輕撫摸動(dòng)物的背部中心三次,在120、140和160 s時(shí),重復(fù)如上所述的觸覺刺激。如果動(dòng)物在聽覺和觸覺刺激下仍超過了時(shí)間限制,將其放回籠子,至少30 min后再次測(cè)試。必須謹(jǐn)慎地進(jìn)行充分的刺激,避免給動(dòng)物帶來(lái)壓力。觸覺刺激應(yīng)該只是非常輕地觸摸動(dòng)物的皮毛,不要以任何方式刺、推或傷害它。聽覺刺激也應(yīng)該是一種柔和的聲音而不應(yīng)過分刺耳。一些研究人員不喜歡使用額外的聽覺或觸覺線索。有三種選擇,一是不使用聽覺/觸覺刺激;二是只用于那些超時(shí)的動(dòng)物;三是默認(rèn)應(yīng)用于所有動(dòng)物。我們的建議是,只有在十分必要的時(shí)候才采用額外的刺激,即在大量超時(shí)的實(shí)驗(yàn)中,只在超時(shí)的動(dòng)物上應(yīng)用。無(wú)論選擇這三種選擇的哪一個(gè),都必須在所有實(shí)驗(yàn)中保持不變。

3. 動(dòng)物放入迷宮中起始臂遠(yuǎn)端,背向目標(biāo)臂,但試驗(yàn)開始后動(dòng)物并不轉(zhuǎn)身。這表明動(dòng)物可能生病、嗜睡或很老了。輕輕地手動(dòng)幫助動(dòng)物轉(zhuǎn)身。如果它開始沿著起始臂移動(dòng),就讓它自由地探索迷宮。如果動(dòng)物保持靜止,輕輕地手動(dòng)引導(dǎo)它沿著起始臂和兩個(gè)目標(biāo)臂中的一個(gè)移動(dòng)。重復(fù)這個(gè)過程*多三次,直到動(dòng)物自發(fā)地轉(zhuǎn)身并沿著迷宮移動(dòng)。如果動(dòng)物可以自發(fā)探索了,那么就開始測(cè)試。如果三次以后動(dòng)物仍然靜止不動(dòng),就把它從迷宮中拿出來(lái)放回籠子里,幾個(gè)小時(shí)后重新測(cè)試。

4. T迷宮有許多與其他開放迷宮或高架迷宮相同的問題,即對(duì)迷宮或?qū)嶒?yàn)者的恐懼,以及它探索和尋找迷宮中食物的動(dòng)機(jī)水平。當(dāng)動(dòng)物對(duì)迷宮或?qū)嶒?yàn)者的應(yīng)激恐懼超過其對(duì)探索和覓食的動(dòng)機(jī)時(shí),動(dòng)物對(duì)迷宮的探索減少,甚至一直呆在迷宮某處不動(dòng)。這種恐懼通常表現(xiàn)為在迷宮中排便和排尿。當(dāng)它被拿起時(shí)也會(huì)尖叫。因此,足夠的適應(yīng)是必要的,動(dòng)物的動(dòng)機(jī)水平可能也需要得到解決。否則,如果動(dòng)物沒有在迷宮中做出選擇,就無(wú)從得知它的記憶能力是正常的還是受損的。

5. 如果在試驗(yàn)中沒有提供**數(shù)量的獎(jiǎng)賞,動(dòng)物可能會(huì)遭受“對(duì)比效應(yīng)”。這指的是,如果收到的獎(jiǎng)賞低于預(yù)期,那么動(dòng)機(jī)就會(huì)降低。曾有研究者在試驗(yàn)后期沒有了足夠的煉乳,所以稀釋的比例超過了建議的1:1,結(jié)果導(dǎo)致小鼠在后面的試驗(yàn)都沒有離開迷宮的起始臂。然而,如果動(dòng)物一直被習(xí)慣于獎(jiǎng)賞數(shù)量在一定范圍內(nèi)的可變性,它們的表現(xiàn)就不太會(huì)受到影響。

6. 對(duì)照組動(dòng)物表現(xiàn)出強(qiáng)烈的單側(cè)偏好。如果健康的大/小鼠表現(xiàn)出強(qiáng)烈的轉(zhuǎn)向左或者右的傾向,那么可能是這一側(cè)有吸引力,或者,另一側(cè)可能有厭惡因素。例如,如果對(duì)雄性小鼠進(jìn)行測(cè)試,在迷宮左側(cè)臂放一個(gè)裝有雌性小鼠的開放籠子,可以觀察到一種強(qiáng)烈的向左轉(zhuǎn)向的傾向。另一方面,如果迷宮上的照明不均勻,一側(cè)臂比另一側(cè)更亮,那這一側(cè)對(duì)大/小鼠來(lái)說是厭惡的,因此總是會(huì)避免進(jìn)入明亮的臂。

7. 若動(dòng)物會(huì)舔迷宮,而不是去探索,那么需要檢查是否使用了一種帶有水果香味的洗滌溶液來(lái)清洗迷宮。如果有,用水濕的紙巾將溶液從迷宮中去除,然后用30%乙醇浸泡的紙巾消除任何殘留的氣味。

8. 大/小鼠傾向于跳出迷宮的這種情況并不常見,但它可能發(fā)生在一些幼年動(dòng)物或接受基因突變、藥理學(xué)操作和導(dǎo)致過度活躍的大腦損毀的動(dòng)物中??梢杂猛该鲹醢甯采w迷宮,或者,增加迷宮側(cè)壁的高度,50厘米應(yīng)該足以防止跳躍逃脫

9. 運(yùn)動(dòng)受損的動(dòng)物沿著起始臂緩慢移動(dòng),到達(dá)目標(biāo)臂時(shí)超過了時(shí)間限制。解決方法可以是改變一下起始位置。在每次試驗(yàn)開始時(shí),將動(dòng)物放置在起始臂的中心位置,而不要放在遠(yuǎn)端,就在選擇區(qū)之前。所有實(shí)驗(yàn)組,包括對(duì)照組,都必須使用相同的起始位置。

10. 對(duì)照組動(dòng)物表現(xiàn)出隨機(jī)水平的交替,這在健康的成年大/小鼠中并不常見。確保在測(cè)試期間,實(shí)驗(yàn)室內(nèi)沒有聽覺、視覺或嗅覺的干擾。確認(rèn)飼養(yǎng)條件是否有規(guī)律,是否沒有壓力。確保測(cè)試前**或測(cè)試當(dāng)天飼養(yǎng)籠沒有改變(實(shí)驗(yàn)前不要換墊料),確保在前幾天動(dòng)物沒有經(jīng)歷壓力操作(如麻醉),手術(shù)后至少恢復(fù)5天再進(jìn)行行為測(cè)試。

11. 若大/小鼠在迷宮中會(huì)排出大量的尿液和糞便,這是動(dòng)物焦慮的跡象。房間里的什么東西可能會(huì)影響了這些動(dòng)物。盡量保證實(shí)驗(yàn)室處在昏暗的光線條件下,而不是在標(biāo)準(zhǔn)照明下,因?yàn)閲X動(dòng)物天生恐光,明亮的光線會(huì)產(chǎn)生焦慮。還要確認(rèn)沒有可以嚇到動(dòng)物的噪音。

12. 若大/小鼠后腿直立,嗅探空氣,而不沿著迷宮移動(dòng),那么需要檢查實(shí)驗(yàn)室里的嗅覺刺激是否分散了動(dòng)物的注意力(例如,如果之前進(jìn)行過采血,但沒有清理干凈),確認(rèn)后消除嗅覺干擾。

13. 動(dòng)物跑得太快了,要人工及時(shí)記錄下所有的結(jié)果是很困難的,尤其是選擇潛伏期。*好是使用自動(dòng)記錄系統(tǒng),比如VisuTrack動(dòng)物行為分析系統(tǒng)(上海欣軟)

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